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bxcell BP0017-1說(shuō)明書
| 克隆 | 目錄 ＃ | 類別 |
|---|---|---|
| MR-1 | BP0017-1 | InVivoPlus 抗體 |
MR-1 單克隆抗體與小鼠 CD154（也稱為 CD40 配體）反應(yīng)。CD154 作為 39 kDa 輔助分子存在，屬于細(xì)胞因子的 TNF 超家族。CD154 主要在活化的 CD4+ T 淋巴細(xì)胞表面表達(dá)，但也可以由血小板、肥大細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、NK 細(xì)胞、B 淋巴細(xì)胞、CD8+ T 淋巴細(xì)胞以及非造血細(xì)胞（包括平滑肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞）表達(dá), 和上皮細(xì)胞。CD154 通過(guò) CD40 發(fā)出信號(hào)，被認(rèn)為在 T 和 B 淋巴細(xì)胞共刺激中起關(guān)鍵作用。據(jù)報(bào)道，MR-1 單克隆抗體可在體外抑制通過(guò)阻斷 T 輔助細(xì)胞上 CD154 與 CD40 的結(jié)合來(lái)激活 B 淋巴細(xì)胞，并抑制生發(fā)中心的形成并破壞抗原特異性 T 細(xì)胞反應(yīng)。此外，T細(xì)胞和抗原呈遞細(xì)胞的MR-1抗體阻斷相互作用在體外和塊實(shí)驗(yàn)性自身免疫性疾病的發(fā)展體內(nèi)。
| 同種型 | 亞美尼亞倉(cāng)鼠 IgG |
| 推薦的同種型對(duì)照 | InVivo Plus™ 多克隆亞美尼亞倉(cāng)鼠 IgG |
| 推薦的稀釋緩沖液 | InVivo Pure™ pH 7.0 稀釋緩沖液 |
| 免疫原 | 激活的小鼠 Th1 克隆 D1.6 |
| 報(bào)告的應(yīng)用程序 |
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| 公式 |
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| *內(nèi)毒素 |
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| *聚合 |
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| 純度 |
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| 無(wú)菌 | 0.2 μM 過(guò)濾 |
| 生產(chǎn) | 在無(wú)動(dòng)物設(shè)施中從組織培養(yǎng)上清液中純化 |
| 純化 | 蛋白A |
| 資源標(biāo)識(shí)符 | AB_1107601 |
| 分子量 | 150 kDa |
| *鼠病原體測(cè)試結(jié)果 |
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| 貯存 | 抗體溶液應(yīng)在 4°C 下以原液濃度儲(chǔ)存。不要凍結(jié)。 |
不同細(xì)胞類型之間的相互作用對(duì)于多種生物過(guò)程至關(guān)重要，包括免疫、胚胎發(fā)育和神經(jīng)元信號(hào)傳導(dǎo)。盡管可以通過(guò)活體顯微鏡在體內(nèi)監(jiān)測(cè)細(xì)胞間相互作用的動(dòng)態(tài)，但這種方法不能提供有關(guān)受體和配體的任何信息，也不能分離相互作用的細(xì)胞以進(jìn)行下游分析。在這里，我們描述了一種互補(bǔ)方法，該方法使用細(xì)菌分選酶 A 介導(dǎo)的跨免疫細(xì)胞突觸的細(xì)胞標(biāo)記來(lái)識(shí)別活體小鼠細(xì)胞之間的受體-配體相互作用，方法是產(chǎn)生隨后可以通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)在體外檢測(cè)到的信號(hào)。我們將這種用于標(biāo)記免疫細(xì)胞之間“親吻和奔跑"相互作用的方法稱為“通過(guò) SorTagging 細(xì)胞間接觸標(biāo)記免疫伙伴關(guān)系"（LIPSTIC）。使用 LIPSTIC，我們表明在體內(nèi) T 細(xì)胞啟動(dòng)期間樹(shù)突狀細(xì)胞和 CD4(+) T 細(xì)胞之間的相互作用以兩種不同的方式發(fā)生：早期的同源階段，在此期間，CD40-CD40L 相互作用特異性地發(fā)生在 T 細(xì)胞和抗原之間。加載樹(shù)突狀細(xì)胞；以及后來(lái)的非同源階段，在此期間，這些相互作用不再需要 T 細(xì)胞受體的事先參與。因此，LIPSTIC 能夠直接測(cè)量體外和體內(nèi)的動(dòng)態(tài)細(xì)胞間相互作用。鑒于其與不同受體-配體對(duì)和一系列可檢測(cè)標(biāo)記一起使用的靈活性，
PU.1 是一種 ETS 家族轉(zhuǎn)錄因子，對(duì)多種造血細(xì)胞譜系的發(fā)育很重要。以前的工作證明了 PU.1 在促進(jìn) Th9 發(fā)育和限制 Th2 細(xì)胞因子產(chǎn)生方面的關(guān)鍵作用。PU.1 在其他 Th 譜系中是否具有功能尚不清楚。在這項(xiàng)研究中，我們檢查了 PU.1 在 CD4+ T 細(xì)胞中異位表達(dá)的影響，并觀察到與 T 濾泡輔助 (Tfh) 細(xì)胞功能相關(guān)的基因表達(dá)降低，包括 Il21 和 Tnfsf5（編碼 CD40L）。來(lái)自在 T 細(xì)胞中缺乏 PU.1 表達(dá)的條件性突變小鼠的 T 細(xì)胞 (Sfpi1lck-/-) 證明體外 CD40L 和 IL-21 的產(chǎn)生增加。在佐劑依賴性或佐劑非依賴性免疫后，我們觀察到 Sfpi1lck-/- 小鼠的 Tfh 細(xì)胞數(shù)量增加，生發(fā)中心 B 細(xì)胞（GCB 細(xì)胞）增加，體內(nèi)抗體產(chǎn)量增加。與對(duì)照小鼠相比，這與來(lái)自 Sfpi1lck-/- 小鼠的 Tfh 細(xì)胞中 IL-21 和 CD40L 的表達(dá)增加相關(guān)。最后，雖然阻斷 IL-21 不會(huì)影響 Sfpi1lck-/- 小鼠中的 GCB 細(xì)胞，但免疫 Sfpi1lck-/- 小鼠的抗 CD40L 治療降低了 GCB 細(xì)胞數(shù)量和 Ag 特異性 Ig 濃度。總之，這些數(shù)據(jù)表明 PU.1 在 Tfh 細(xì)胞、生發(fā)中心和 Tfh 依賴性體液免疫的功能中具有抑制作用。免疫的 Sfpi1lck-/- 小鼠的抗 CD40L 治療降低了 GCB 細(xì)胞數(shù)量和 Ag 特異性 Ig 濃度。總之，這些數(shù)據(jù)表明 PU.1 在 Tfh 細(xì)胞、生發(fā)中心和 Tfh 依賴性體液免疫的功能中具有抑制作用。免疫的 Sfpi1lck-/- 小鼠的抗 CD40L 治療降低了 GCB 細(xì)胞數(shù)量和 Ag 特異性 Ig 濃度。總之，這些數(shù)據(jù)表明 PU.1 在 Tfh 細(xì)胞、生發(fā)中心和 Tfh 依賴性體液免疫的功能中具有抑制作用。
目前治療炎癥性腸病的療法療效有限，副作用顯著，并且通常會(huì)隨著時(shí)間的推移而減弱。關(guān)于在結(jié)腸炎粘膜愈合過(guò)程中起作用的細(xì)胞和分子機(jī)制知之甚少。為了研究此類事件，我們開(kāi)發(fā)了一種新的可逆性結(jié)腸炎模型，其中將 CD4+CD45RBhi T 細(xì)胞過(guò)繼轉(zhuǎn)移到傷寒桿菌定植的淋巴細(xì)胞減少小鼠中，導(dǎo)致結(jié)腸炎癥的快速發(fā)作，而這種炎癥可通過(guò)消耗致結(jié)腸炎 T 細(xì)胞來(lái)逆轉(zhuǎn)。緩解與臨床和組織病理學(xué)評(píng)分的改善、腸粘膜免疫細(xì)胞浸潤(rùn)減少、腸道基因表達(dá)譜改變、結(jié)腸粘液層再生以及上皮屏障完整性的恢復(fù)有關(guān)。尤其，致結(jié)腸炎 T 細(xì)胞不僅對(duì)結(jié)腸炎的誘導(dǎo)至關(guān)重要，而且對(duì)疾病的維持也很重要。致結(jié)腸炎 T 細(xì)胞的消耗導(dǎo)致腫瘤壞死因子 α (TNFα) 水平迅速下降，這與炎癥免疫細(xì)胞對(duì)炎癥部位的浸潤(rùn)減少有關(guān)。雖然中和 TNFalpha 阻止了結(jié)腸炎的發(fā)作，但對(duì)患有已確定疾病的小鼠進(jìn)行抗 TNFalpha 治療未能解決結(jié)腸炎癥。總的來(lái)說(shuō)，這種可逆性結(jié)腸炎的新模型為研究慢性腸道緩解-復(fù)發(fā)性疾病的粘膜愈合動(dòng)力學(xué)提供了重要的研究工具。致結(jié)腸炎 T 細(xì)胞的消耗導(dǎo)致腫瘤壞死因子 α (TNFα) 水平迅速下降，這與炎癥免疫細(xì)胞對(duì)炎癥部位的浸潤(rùn)減少有關(guān)。雖然中和 TNFalpha 阻止了結(jié)腸炎的發(fā)作，但對(duì)患有已確定疾病的小鼠進(jìn)行抗 TNFalpha 治療未能解決結(jié)腸炎癥。總的來(lái)說(shuō)，這種可逆性結(jié)腸炎的新模型為研究慢性腸道緩解-復(fù)發(fā)性疾病的粘膜愈合動(dòng)力學(xué)提供了重要的研究工具。致結(jié)腸炎 T 細(xì)胞的消耗導(dǎo)致腫瘤壞死因子 α (TNFα) 水平迅速下降，這與炎癥免疫細(xì)胞對(duì)炎癥部位的浸潤(rùn)減少有關(guān)。雖然中和 TNFalpha 阻止了結(jié)腸炎的發(fā)作，但對(duì)患有已確定疾病的小鼠進(jìn)行抗 TNFalpha 治療未能解決結(jié)腸炎癥。總的來(lái)說(shuō)，這種可逆性結(jié)腸炎的新模型為研究慢性腸道緩解-復(fù)發(fā)性疾病的粘膜愈合動(dòng)力學(xué)提供了重要的研究工具。
單核細(xì)胞譜系的組織效應(yīng)細(xì)胞可以根據(jù)其環(huán)境分化為具有特定細(xì)胞功能的不同細(xì)胞類型。介導(dǎo)移植耐受誘導(dǎo)的免疫保護(hù)性巨噬細(xì)胞的表型、發(fā)育要求和功能機(jī)制仍然難以捉摸。在這里，我們證明共刺激有利于抑制 CD8(+) T 細(xì)胞免疫并促進(jìn) CD4(+) Foxp3(+) Treg 細(xì)胞擴(kuò)增的表達(dá) DC-SIGN 的巨噬細(xì)胞的積累。從機(jī)制上講，巖藻糖基化配體和 TLR4 信號(hào)傳導(dǎo)的同時(shí) DC-SIGN 參與是產(chǎn)生與延長(zhǎng)同種異體移植物存活相關(guān)的免疫調(diào)節(jié) IL-10 所必需的。在體內(nèi)刪除表達(dá) DC-SIGN 的巨噬細(xì)胞，干擾其 CSF1 依賴性發(fā)育，或阻止 DC-SIGN 信號(hào)通路消除耐受性。總之，這些結(jié)果為共刺激阻斷的致耐受效應(yīng)提供了新的見(jiàn)解，并將 DC-SIGN(+) 抑制性巨噬細(xì)胞鑒定為免疫耐受的關(guān)鍵介質(zhì)，并伴隨臨床治療意義。
移植是治療終末期器官衰竭的一種方法，但在沒(méi)有藥物免疫抑制的情況下，同種異體器官會(huì)被急性排斥。這種排斥總是導(dǎo)致同種異體致敏和二級(jí)供體匹配移植物的加速排斥。可以在動(dòng)物和一部分人類中誘導(dǎo)移植耐受性，并且可以長(zhǎng)期接受同種異體移植物而無(wú)需維持免疫抑制。然而，移植排斥可能在獲得移植耐受狀態(tài)很久之后發(fā)生。當(dāng)這種同種異體移植物被拒絕時(shí)，假定同種異體致敏規(guī)則適用于非耐受宿主，并且免疫耐受性喪失。我們使用心臟移植的小鼠模型表明，當(dāng)單核細(xì)胞增生李斯特菌感染導(dǎo)致急性排斥反應(yīng)時(shí)，因此廢除移植耐受性，供體特異性耐受狀態(tài)重新出現(xiàn)，允許自發(fā)接受供體匹配的第二次移植。這些數(shù)據(jù)表明，同種異體移植耐受的記憶勝過(guò)移植排斥的記憶。
記憶 CD8(+) T 細(xì)胞在初級(jí)反應(yīng)期間被編程，以獲得穩(wěn)健的次級(jí)反應(yīng)。在這里，我們顯示 CD8(+) T 細(xì)胞對(duì)流感病毒的不同表位作出反應(yīng)，在初級(jí)反應(yīng)期間收到了質(zhì)上不同的信號(hào)，從而改變了它們的次級(jí)反應(yīng)性。核蛋白 (NP) 特異性 CD8(+) T 細(xì)胞在初級(jí)反應(yīng)的后期遇到 CD40 許可、CD70 表達(dá)、CD103(-)CD11b(hi) 樹(shù)突狀細(xì)胞 (DC) 上的抗原。因此，它們維持 CD25 表達(dá)并對(duì)白細(xì)胞介素 2 (IL-2) 和 CD27 做出反應(yīng)，這兩者共同編程了它們強(qiáng)大的二次增殖能力和干擾素-γ (IFN-γ) 產(chǎn)生能力。相比之下，聚合酶 (PA) 特異性 CD8(+) T 細(xì)胞在初級(jí)反應(yīng)的后期沒(méi)有遇到攜帶抗原的、CD40 激活的 DC，沒(méi)有接受 CD27 和 CD25 信號(hào)，也沒(méi)有被編程為具有強(qiáng)大增殖和細(xì)胞因子產(chǎn)生能力的記憶 CD8(+) T 細(xì)胞。因此，CD8(+) T 細(xì)胞響應(yīng)豐富的抗原，如 NP，主導(dǎo)了二次反應(yīng)。
效應(yīng)和記憶 T 細(xì)胞可能與同種異體 Ag 發(fā)生交叉反應(yīng)以介導(dǎo)移植排斥。盡管對(duì) Th1 細(xì)胞的共刺激特性進(jìn)行了充分研究，但對(duì)微生物引發(fā)的 Th17 細(xì)胞的共刺激要求知之甚少。共刺激阻滯劑 CTLA-4 Ig 在治療幾種 Th17 驅(qū)動(dòng)的自身免疫性疾病方面無(wú)效，并且與腎移植后的嚴(yán)重急性排斥有關(guān)，導(dǎo)致我們研究 Th17 細(xì)胞是否在 CD28/CTLA-4 阻滯抵抗中起作用異體反應(yīng)。我們建立了一個(gè) Ag 特異性模型，其中 Th1 和 Th17 細(xì)胞分別通過(guò)結(jié)核分枝桿菌和白色念珠菌免疫引起。C。白色念珠菌免疫引起更高頻率的 Th17 細(xì)胞，并賦予移植后對(duì)共刺激阻斷的抗性。與結(jié)核分枝桿菌組相比，白色念珠菌誘導(dǎo)的 Th17 細(xì)胞含有較高頻率的 IL-17(+)IFN-γ(+) 生產(chǎn)者和較低頻率的 IL-10(+) 和 IL-10(+) )IL-17(+) 細(xì)胞。重要的是，Th17 細(xì)胞差異調(diào)節(jié) CD28/CTLA-4 通路，與 Th1 細(xì)胞相比，表達(dá)同樣高的 CD28，但 CTLA-4 的量顯著增加。離體阻斷實(shí)驗(yàn)表明 Th17 細(xì)胞對(duì) CTLA-4 共抑制更敏感，因此對(duì) CTLA-4 Ig 不太敏感。
尚未*了解胸腺中調(diào)節(jié)性 T 細(xì)胞 (T(reg)) 生成的發(fā)育途徑。在這項(xiàng)研究中，我們用四環(huán)素誘導(dǎo)的 Zap70 轉(zhuǎn)基因重組了 Zap70 缺陷胸腺細(xì)胞的胸腺發(fā)育，以允許 T(reg) 發(fā)育的時(shí)間解剖。我們發(fā)現(xiàn) T(reg) 以*的動(dòng)力學(xué)發(fā)展，首先出現(xiàn)在 CD4 單陽(yáng)性 (SP) 胸腺細(xì)胞中的第 4 天。CD25(+)Foxp3(+) T(reg) 選擇的*模型建議通過(guò) CD25(+)Foxp3(-) CD4 SP 前體進(jìn)行開(kāi)發(fā)。相比之下，我們的動(dòng)力學(xué)分析顯示存在豐富的 CD25(-)Foxp3(+) 細(xì)胞，這些細(xì)胞在響應(yīng) IL-2 時(shí)非常有效地成熟為 CD25(+)Foxp3(+) 細(xì)胞。CD25(-)Foxp3(+) 細(xì)胞在發(fā)展動(dòng)力學(xué)和自身肽MHC 的親和力方面更接近成熟的T(reg)。這些群體在發(fā)育過(guò)程中也表現(xiàn)出對(duì)細(xì)胞因子的不同需求。CD25(-)Foxp3(+) 細(xì)胞依賴于 IL-15，而 CD25(+)Foxp3(+) 的產(chǎn)生則特別需要 IL-2。最后，我們發(fā)現(xiàn) IL-2 和 IL-15 來(lái)自體內(nèi)不同的來(lái)源。IL-15 是基質(zhì)來(lái)源的，而 IL-2 僅來(lái)自依賴完整 CD4 譜系發(fā)育的造血細(xì)胞，而不是經(jīng)歷 Ag 的細(xì)胞或 NKT 細(xì)胞。
T 濾泡輔助 (Tfh) 細(xì)胞為 B 細(xì)胞提供幫助，對(duì)于生發(fā)中心 (GC) 反應(yīng)的建立至關(guān)重要，包括產(chǎn)生高親和力抗體和記憶 B 細(xì)胞和長(zhǎng)壽漿細(xì)胞。在這里，我們報(bào)告 Tfh 細(xì)胞反應(yīng)的大小由抗原量決定，并與 GC B 細(xì)胞反應(yīng)的大小直接相關(guān)。此外，維持 Tfh 細(xì)胞表型需要 GC B 細(xì)胞持續(xù)的抗原刺激。在淋巴細(xì)胞減少的情況下，強(qiáng)烈且持續(xù)的 Tfh 細(xì)胞反應(yīng)導(dǎo)致旁觀者 B 細(xì)胞激活、高丙種球蛋白血癥以及多反應(yīng)性抗體和自身反應(yīng)性抗體的產(chǎn)生。這些數(shù)據(jù)表明抗原劑量決定了 Tfh 細(xì)胞反應(yīng)和 GC 反應(yīng)的大小和持續(xù)時(shí)間，
我們最近發(fā)現(xiàn)了一種保護(hù)性 MHC Ib 類限制性 CD8 T 細(xì)胞對(duì)小鼠多瘤病毒感染的反應(yīng)。這些 CD8 T 細(xì)胞識(shí)別來(lái)自 VP2 病毒衣殼蛋白的 aa 139-147 的肽，該肽與非多態(tài)性 H-2Q9 分子結(jié)合，該分子是與β(2)m 相關(guān)的 MHC Ib 類分子的 Qa-2 家族的成員。Q9：VP2.139 特異性 CD8 T 細(xì)胞表現(xiàn)出不尋常的通貨膨脹反應(yīng)，其特征是在 3 個(gè)月內(nèi)逐漸擴(kuò)張，然后是穩(wěn)定的維持階段。我們之前已經(jīng)證明 Q9:VP2.139 特異性 CD8 T 細(xì)胞依賴于 Ag 進(jìn)行擴(kuò)增，但不依賴于長(zhǎng)期維持。在這項(xiàng)研究中，我們檢驗(yàn)了 Q9:VP2.139 特異性 T 細(xì)胞反應(yīng)的擴(kuò)增和維持成分不同地依賴于 CD4 T 細(xì)胞幫助和 CD28 共刺激的假設(shè)。CD4(+) 細(xì)胞和 CD28/CD40L 消耗削弱了 Q9:VP2.139 特定 CD8 T 細(xì)胞的擴(kuò)張，并且內(nèi)在的 CD28 信號(hào)足以進(jìn)行擴(kuò)張。相比之下，CD4 T 細(xì)胞不足，而不是 CD28/CD40L 阻斷，導(dǎo)致 Q9:VP2.139 特異性 CD8 T 細(xì)胞在維持階段的頻率下降。這些結(jié)果表明 Q9:VP2.139 特異性 CD8 T 細(xì)胞對(duì)小鼠多瘤病毒感染的反應(yīng)依賴于 CD4 T 細(xì)胞幫助和 CD28 共刺激以促進(jìn)膨脹，但僅依賴于 CD4 T 細(xì)胞幫助維持。
記憶 B 細(xì)胞可以從經(jīng)典的生發(fā)中心 (GC) 途徑或不太了解的 GC 獨(dú)立途徑產(chǎn)生。我們使用基于抗原的細(xì)胞富集來(lái)評(píng)估這些途徑對(duì)多克隆記憶 B 細(xì)胞庫(kù)的相對(duì)貢獻(xiàn)。我們確定了一個(gè) CD38(+) GL7(+) B 細(xì)胞前體群體，它以響應(yīng)強(qiáng) CD40 刺激的 GC 獨(dú)立方式直接分化為 IgM(+) 或同種型轉(zhuǎn)換 (sw) Ig(+) 記憶 B 細(xì)胞。或者，CD38(+) GL7(+) B 細(xì)胞前體有可能成為 Bcl-6(+) GC 細(xì)胞，然后主要生成 swIg(+) 記憶 B 細(xì)胞。這些結(jié)果表明早期 IgM(+) 和 swIg(+) 記憶 B 細(xì)胞是獨(dú)立于 GC 的途徑的產(chǎn)物，而后來(lái)切換的 Ig(+) 記憶 B 細(xì)胞是 GC 細(xì)胞的產(chǎn)物。
要設(shè)計(jì)成功的慢性病疫苗，了解記憶 CD8(+) T 細(xì)胞對(duì)持久性抗原再刺激的反應(yīng)至關(guān)重要。然而，大多數(shù)比較記憶和初始細(xì)胞反應(yīng)的研究?jī)H在快速清除的急性感染中進(jìn)行。在此，通過(guò)比較記憶和幼稚 CD8(+) T 細(xì)胞對(duì)急性和慢性淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎病毒感染的反應(yīng)，我們表明記憶細(xì)胞在幼稚細(xì)胞上占主導(dǎo)地位，并且在存在足夠數(shù)量時(shí)具有保護(hù)作用，可以快速減少感染。相反，當(dāng)感染沒(méi)有迅速減少時(shí)，由于高抗原負(fù)荷或持續(xù)存在，記憶細(xì)胞會(huì)迅速丟失，這與幼稚細(xì)胞不同。這種記憶細(xì)胞的喪失是由于抑制細(xì)胞增殖、抑制性受體 2B4 的選擇性調(diào)節(jié)、并增加對(duì) CD4(+) T 細(xì)胞幫助的依賴。因此，強(qiáng)調(diào)設(shè)計(jì)能引發(fā)有效 CD4(+) T 細(xì)胞幫助和快速控制感染的疫苗的重要性。
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