orimabs目錄

酵母展示載體

pYDS1（貨號：mAb001）

pYDS1是一種酵母展示載體，用于在酵母菌株EBY100表面展示單體scFv。AGA1是酵母細胞表面蛋白，AGA2通過2個二硫鍵與AGA1偶聯(lián)。通過鉸鏈與AGA2的C末端融合，scFv顯示在酵母表面。設(shè)計scFv的N末端的標志標簽和C末端的V5標簽，以便通過流式細胞術(shù)方便地檢測scFv的表達和抗原結(jié)合。（G4S）3柔性接頭被設(shè)計為VL和VH之間的內(nèi)部接頭。該載體設(shè)計用于VL和VH的逐步克隆，并且VH和VL克隆的所有酶位點均未出現(xiàn)在VH和VL種系基因中，并且翻譯的氨基酸有利于形成柔性接頭。 

引用

pYDS1.1 （Cat＃：mAb002）

pYDS1.1與pYDS1的單體scFv展示相似，只是VL和VH的多個克隆位點縮短至9 bp，這允許使用PCR純化試劑盒直接純化線性化載體，而無需通過凝膠去除9 bp插入片段分離。該載體被設(shè)計用于VL和VH的一步克隆，既可以組裝成scFv，也可以通過三個片段缺口修復(fù)。酵母具有的同源重組系統(tǒng)，該系統(tǒng)可通過為三個片段設(shè)計的同源末端將共轉(zhuǎn)化的線性化載體VL和VH有效地組裝成正確的向量scFv形式。 

引用

pYDS2 （貨號：mAb003）

如果將分離的scFv的終目標設(shè)計為二聚體，例如scFv-Fc或全抗體，則建議使用二聚體-scFv庫，因為高親和力單體scFv可能無法轉(zhuǎn)化為更高親和力的二聚體。明智的方法是直接隔離具有較暗淡形式的高親和力的scFv。pYDS2是為此目的而設(shè)計的。通過鉸鏈區(qū)中的天然3個二硫鍵，在酵母表面上顯示出較暗的scFv。pYDS2設(shè)計用于像pYDS1一樣逐步克隆VL和VH。所有標簽，接頭和酶位點均與pYDS1相同，可進行有效的基因克隆，靈活的接頭和方便的流式細胞術(shù)檢測scFv。
 

引用

酵母分泌表達載體
 

pYS1 （Cat＃：mAb004） 和pYS2 （Cat＃：mAb005）

通過磁性和流式分選富集抗原特異性酵母展示種群后，可以使用流式細胞儀鑒定高親和力的單個scFc克隆。然而，這是費時和費力的，并且顯示scFv需要稍后為了親和力和其他表征而轉(zhuǎn)化為可溶形式。如果將展示型scFv轉(zhuǎn)化為可溶性scFv，然后使用高通量ELISA鑒定單個克隆，則效率更高。pYS1和pYS2載體pYDS1，pYDS1.1和pYDS2的對應(yīng)物被設(shè)計用于可溶性scFv表達。只需使用PCR從富集的展示酵母種群中擴增scFv基因，并與線性化載體pYS1，pYS1.1或pYS2共轉(zhuǎn)化為YVH10酵母菌株，挑選單個克隆，在96個深孔板中培養(yǎng)并誘導，含有scFv的上清液可用于ELISA鑒定。可以從96孔儲備液中擴增陽性克隆，以進行大規(guī)模scFv純化以進一步表征。載體pYS1與pYDS1和pYDS1.1配對用于單體scFv表達，而pYS2與pYDS2對用于調(diào)光scFv表達。
 

引用

噬菌體展示載體

pDCK1 （Cat＃：mAb006） 和pDCL1 （Cat＃：mAb007）

載體pDCK1和pDCL1分別包含IgG1的CH1恒定區(qū)，kappa和λ恒定區(qū)，用于Fab展示，只需將VL / VK和VH克隆到載體中即可。所有恒定區(qū)均針對大腸桿菌表達進行了密碼子優(yōu)化，并且為有效消化和連接而設(shè)計的所有酶位點均未出現(xiàn)在抗體V基因中。已經(jīng)為VK / VL和VH克隆酶設(shè)計了長填充序列，以進行有效的酶消化。這兩個載體也可以用于使用Xba I / Not I消化的噬菌體展示scFv庫構(gòu)建。

引用

pDCK1.1 （Cat＃：mAb008） 和pDCL1.1 （Cat＃：mAb009）

pDCK1.1和pDCL1.1載體分別與pDCK1和pDCL1相同，不同之處在于VK / VL和VH克隆酶的填充序列縮短到9bp，從而可以通過PCR純化試劑盒方便地純化消化的載體，而無需人工操作消耗凝膠分離。 
 

引用

雙順反子慢病毒載體

pLENI （Cat＃：mAb010） 和pLEN2A （Cat＃：mAb011）


建立抗原陽性細胞系對于基于細胞的抗體文庫淘選和隨后驗證分離的抗體是必需的。慢病毒載體pLENI和pLEN2A設(shè)計用于同時雙順反子表達目的蛋白和EGPF。EGFP將在細胞內(nèi)表達，以方便觀察成功的病毒感染和基因表達，以及通過FACS（熒光激活細胞分選）純化高表達細胞。如果目的蛋白質(zhì)是細胞膜蛋白質(zhì)，則翻譯的蛋白質(zhì)將位于細胞表面。載體pLENI使用IRES（內(nèi)部核糖體進入位點）序列連接目標基因和EGFP基因，以確保兩種蛋白質(zhì)的mRNA表達水平相同；而載體pLEN2A使用2A序列來確保兩種蛋白的蛋白表達水平相同，它會被內(nèi)體2A位點的酶切割所分離。通過將pLENI或pLEN2A與提供VSVG，REV和Gag / pol蛋白表達的載體共轉(zhuǎn)染到HEK293細胞中，可以輕松制得慢病毒。
 

引用

大腸桿菌  表達載體

pECO （貨號：mAb012）

載體pECO設(shè)計用于通過大腸桿菌從強噬菌體T7啟動子高水平表達目的基因。所有的酶都是為方便和有效的基因克隆而設(shè)計的。沒有為此向量設(shè)計的標簽。為了方便純化，可以根據(jù)需要在目的蛋白的N或C端設(shè)計His6標簽。IPTG誘導蛋白質(zhì)表達。
 

引用

哺乳動物細胞表達載體
 

pMAM1 （貨號：mAb013）

載體pMAM1設(shè)計用于在哺乳動物細胞（例如CHO或HEK293細胞）中表達分泌蛋白。強大的CMV啟動子驅(qū)動蛋白質(zhì)表達，由B淋巴細胞中大多數(shù)抗體分泌固有的VH3信號肽引導，然后是His8標簽以方便蛋白質(zhì)純化。設(shè)計了多個克隆位點中的酶以方便，地克隆基因。重組蛋白可以直接從上清液中純化。如果使用無血清哺乳動物細胞表達系統(tǒng)，則一步純化鎳樹脂可產(chǎn)生高純度的蛋白質(zhì)。新基因表達盒允許通過G418選擇建立穩(wěn)定的表達細胞系。

引用

pMAM1-nFc （Cat＃：mAb014） 和pMAM1-cFc （Cat＃：mAb015）

如果血清分泌在細胞外，則無血清哺乳動物表達系統(tǒng)可以方便，地純化高純度蛋白質(zhì)。如果蛋白質(zhì)是天然分泌蛋白，通常很容易在上清液中表達蛋白質(zhì)。然而，在許多情況下，細胞內(nèi)蛋白質(zhì)或部分蛋白質(zhì)，例如細胞表面蛋白質(zhì)的細胞外結(jié)構(gòu)域，很難在分泌途徑中表達，這很可能是由于其天然易位機制的改變。難于表達的蛋白質(zhì)與易表達的蛋白質(zhì)如Fc的融合是一種解決方案，因為易表達的蛋白質(zhì)可以充當將難于表達的蛋白質(zhì)帶出細胞的載體。為此目的設(shè)計了載體pMAM1-nFc和pMAM1-cFc。它們基于通過在目標蛋白質(zhì)的N或C末端引入人IgG1 Fc片段來構(gòu)建pMAM1。為了方便純化，在融合蛋白的N末端設(shè)計了His8標簽。為避免Fc與目標蛋白之間可能的構(gòu)象障礙，在Fc與多克隆位點（MCS）之間設(shè)計了柔性（G4S）3接頭。還可通過在兩個蛋白之間設(shè)計的位點通過TEV切割從融合蛋白中去除Fc片段。細胞表面抗原的胞外域的制備通常是非常具有挑戰(zhàn)性的。這兩個融合載體能夠高水平表達大多數(shù)細胞表面蛋白的胞外域。

引用

人類VH，VL和VK引物  （貨號：  mAb 016）

基于大的抗體數(shù)據(jù)庫IMGT，我們設(shè)計了一組能夠擴增所有人類抗體庫的簡并引物。正向引物退火至V基因的一框架區(qū)，而反向引物退火至J基因。總共為VH設(shè)計了7個正向和3個反向引物。為VK設(shè)計5個正向和4個反向引物，為VL設(shè)計9個正向和5個反向引物。IgM的反向引物也可用于天真的文庫構(gòu)建。 

引用

大腸桿菌感受態(tài)細胞
 

*0 （Cat＃：mAb017） （20個反應(yīng)，價格$ 200，化學）
*0具有化學感受態(tài)的大腸桿菌在單個試管中的轉(zhuǎn)化效率為1 x 109 cfu / µg質(zhì)粒DNA。它們是克隆和質(zhì)粒繁殖的理想選擇。它們允許高拷貝數(shù)質(zhì)粒的穩(wěn)定復(fù)制。

BL21 （Cat＃：mAb018） （20個反應(yīng)，售價200美元，化學）
BL21化學感受態(tài)細胞在單個試管中的轉(zhuǎn)化效率為1 x 108 cfu / µg質(zhì)粒DNA。BL21大腸桿菌細胞是高水平表達無毒重組蛋白的理想選擇。

TG1 （Cat＃：mAb019） （20個反應(yīng)，售價200美元，電穿孔）
TG1是構(gòu)建噬菌體展示庫的標準細胞。TG1電感受態(tài)細胞具有1×1010 cfu / µg質(zhì)粒DNA的率，非常適合噬菌體展示抗體或肽庫的構(gòu)建。 
 

加載緩沖區(qū)

DNA上樣緩沖液（10 x） （Cat＃：mAb020）（3 x 1 ml，$ 30）
DNA上樣緩沖液（10X）是一種液體緩沖液，可輕松裝載和跟蹤
瓊脂糖或天然聚丙烯酰胺凝膠中的DNA樣品。 

蛋白質(zhì)上樣緩沖液（6x） （Cat＃：mAb021）（10 ml，$ 15）
Laemmli是一種用于蛋白質(zhì)電泳和蛋白質(zhì)印跡的樣品緩沖液。將每一體積的6X樣品緩沖液添加到五體積的蛋白質(zhì)樣品中，煮沸或加熱5-10分鐘。