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Nanolight H-腔腸素說明書

Coelenterazine h

Cat＃301 Coelenterazine h

Coelenterazine h（天然Coelenterazine的2-脫氧衍生物）

比具有Apoaequorin的天然Coelenterazine高2倍的 初始光輸出。Renilla熒光素酶
降低但持續時間更長。

化合物ID：	Coelenterazine h或2-Deoxycoelenterazine
CAS＃：	50909-86-9
IUPAC名稱：	2,8-二芐基-6-（4-羥基苯基）咪唑并[1,2-a]吡嗪-3（7H） - 酮
分子式：	C 26 H 21 N 3 O 2
MW：	407.5
結構體：

熒光素作為過濾的，凍干的，分批控制的底物
以500μg等分試樣（1mg = 2×500μg）和5mg和10mg（2×5mg）等分試樣運輸。

凍干熒光素的優點是：

• 為每組實驗預先分裝少量新鮮底物
• 保質期長（在氬氣下包裝）
• 由于其精細的晶體結構，溶解速度更快
• 等分試樣之間的質量始終如一

運輸：通過FedEx或UPS在RT，隔夜或第二次發貨。儲存在-80 ° C。避光。

背景介紹

腔腸素（Coelenterazine）是自然界中資源豐富的天然熒光素，是絕大多數海洋發光生物（超過75%）的光能貯存分子。腔腸素可作為許多熒光素酶的底物，如海腎熒光素酶（Rluc），Gaussia分泌型熒光素酶（Gluc），以及包括水母發光蛋白（aequorin）和藪枝螅發光蛋白（Obelia）在內的光蛋白（Photoproteins）。與甲蟲（或螢火蟲）熒光素/熒光素酶系統不同，腔腸素/熒光素酶系統不需要三磷酸腺苷（ATP），更便于體內生物熒光的研究。因此，腔腸素常用作基于熒光分析的報告基因檢測以及活體動物檢測的發光底物。

目前商業化的腔腸素應用普遍的是天然腔腸素（Coelenterazine native），另外還有很多腔腸素衍生物如Coelenterazine h、Coelenterazine 400a、Coelenterazine cp、Coelenterazine f、Coelenterazine hcp、Coelenterazine n等被一一合成。理論上這些腔腸素可用于相同的實驗，但是由于其發光波長，細胞膜滲透性，光量子效率上的差異，使得其在相同應用上表現出不同的實驗效果。

腔腸素的種類

天然腔腸素（Coelenterazine Native）

也叫腔腸素游離酸，是海腎熒光素酶（Rluc）和Gaussia熒光素酶（Gluc）等多種熒光素酶的作用底物，也是水母發光蛋白的輔助因子。

產品應用：檢測活細胞中鈣離子濃度、基因報告分析、BRET（生物發光共振能量轉移）研究、ELISA、HTS以及組織或細胞中ROS水平的化學發光檢測等。

腔腸素h（Coelenterazine h）

是海腎熒光素酶（Rluc）和Gaussia熒光素酶（Gluc）等多種熒光素酶的作用底物，也是水母發光蛋白的輔助因子。

產品應用：發光強度比天然腔腸素高10倍以上，適用于報告基因分析，活細胞中鈣離子濃度檢測。

腔腸素hcp（Coelenterazine hcp）

是天然腔腸素的衍生物之一。腔腸素hcp-水母發光蛋白復合物的熒光強度比天然腔腸素復合物高190倍，且量子產量高和Ca²⁺反應速度快，非常適合用于鈣離子水平的檢測。

產品應用：適合用于鈣離子水平的檢測。

腔腸素400a（Coelenterazine 400a）

天然腔腸素的衍生物之一，也稱為DeepBlue C^TM，是海腎熒光素酶（Rluc）的良好底物，其大發射波長在400nm左右，對GFP受體蛋白的信號干擾小，不能被Gaussia分泌型熒光素酶（Gluc）氧化。

產品應用：BRET（生物發光共振能量轉移）研究的優先選擇腔腸素類底物

腔腸素f（Coelenterazine f）

與天然腔腸素結構上的僅有差別在于將其R-1位酚基上的羥基替換成氟（F），是水母發光蛋白（aequorin）的優先選擇底物。與天然腔腸素-水母蛋白（Apoaequorin）復合物產生的光子總數相比，此復合物僅產生80%的光子能。其優點在于：僅需非常少的時間來生成aequorin復合物。當其與Ca²⁺接觸，即可快速且高產量的發光，產能強度是天然腔腸素的20倍。另外其具有好的細胞滲透性。

產品應用：當需要*的Ca²⁺檢測靈敏度來研究水母蛋白再生實驗，推薦使用本底物。

腔腸素cp（Coelenterazine cp）

是天然腔腸素的衍生物之一。其與水母蛋白（Apoaequorin protein）形成的光蛋白復合物的發光強度是天然腔腸素的15倍，且具有更快的Ca²⁺反應速率。

產品應用：可用于 G-蛋白偶聯受體(GPCRs)藥物的高通量篩選研究。

腔腸素n（Coelenterazine n）

所有的腔腸素衍生物中熒光強度是弱的，且對Ca²⁺反應速率也明顯低于天然腔腸素。

腔腸素e（Coelenterazine e）

一種天然腔腸素衍生物，結構上比天然腔腸素多了一個乙基。作為海腎熒光素酶的底物，其熒光強度是天然腔腸素的137%。腔腸素e具有高的體外水母發光蛋白反應性，且具有雙發射峰（405& 465），從而可在pCa 5-7范圍內通過雙波長的比例測定Ca²⁺濃度，由于該法不依賴于腔腸素濃度，因此提高了檢測性。因該衍生物的細胞通透性較差，所以對于細胞內相關實驗則無此優勢，。

產品應用：非常有用的Ca²⁺低靈敏檢測底物。

二甲基腔腸素（Coelenterazine 2-methyl ）

是一種細胞強抗氧化劑，可作用于細胞內的活性氧，如單態氧和超氧陰離子，而氧化應激是細胞凋亡過程的中介環節，另外該化合物具有無毒、細胞膜通透性等特性，故可用于研究細胞凋亡。

產品應用：1）作為研究細胞凋亡的重要工具；2）二甲基腔腸素還可通過化學發光法來檢測超氧陰離子和過氧亞硝酸陰離子水平。

Nanolight H-腔腸素使用方法：

Cat# 301 h-Coelenterazine Cas# 50909-86-9 MW 407.46

一般說明：H-腔腸素（CTZ）是天然腔腸素的脫氫氧衍生物。
H-CTZ和其他類似物的研究可追溯到1989年，當時生物化學雜志，作者：O.Shimomura博士（Biochem.J.1989年8月1日；261（3）；913-920）
已發布。
Shimomura博士、Musicki博士和Kishi博士合成了幾種不同的類似物coelenterazine和用這些代替了天然的柯侖他拉嗪來制造我們喜歡稱之為“帶電”的東西。
綠松石素，意思是當分子被加上三個鈣原子在“彈出”時，基質就可以發光了。合成的“半合成綠松石”對鈣有很高的敏感性，記錄了其發射動力學以及總光子通量和光譜。
總結他們對h-ctz的發現；當與自然發生或自然發生的比較時
coelenterazine，h-coelenterazine產生的初始光強度是總光強度的10倍。
產生的光子總數為82%。基本上，初的光輸出被壓縮，10倍的閃光強度在一個適度較短的上升時間被注意到。
讀者感興趣的可能是下面提到的類似物CTZ-F，其中氟取代了R環上的對羥基。這種替代產生18倍的強度
與本地相比，上升時間非常短，與本地相比，總通量為80%。 

請注意：光蛋白與熒光素酶有明顯不同。H-CTZ和CTZ-F可能與Renilla熒光素酶一起使用，但兩者都不能與Gaussia熒光素酶一起使用。

作為綠松石素底物的腔四嗪類似物：

作為Renilla熒光素酶底物的coelenterazine類似物：

貯存和貯存壽命：*干燥的H-腔四嗪粉末在密閉管中相當穩定，在-20℃或更低溫度下貯存，避光。為了達到宜效果，將任何CTZ的表面積保持在低限度，并使用氬防止自動氧化。
稀釋：在用于所有光度計分析或實驗之前，應立即制備新鮮的“增溶”溶液。如果您使用CTZ作為篩選工具，對于多個井或多個板閱讀器，請組成一個非常集中的庫存解決方案CTZ。+
酒精或丙二醇（可選擇口味），然后應將溶解的CTZ添加到水緩沖液中（宜：脫氣）。這個解決方案是什么應該進入你的光度計泵水庫。
如果在動物研究中使用，我們建議使用我們的優化注射A-lume產品cat.301-inj。

當執行多板閱讀器分析時，您想比較RLU
結果在96或更多板塊的口井和后一口井之間，請注意
CTZ將在水溶液中持續氧化（見下圖，使用兩種廣泛使用的緩沖液進行）。
用于適當的時間相關控件，以便能夠比較結果。